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Premium One Expression Kit (CFS-EDX-ONE)

厂家:天根生化科技(北京)有限公司
  目录号 规 格 价 格
CFS-EDX-ONE 55 µl×24 rxn 5000元
产品简介

本试剂盒能够通过线性模板或质粒模板实现小规模蛋白表达。本试剂盒采用转录和翻译偶联的方法,试剂盒中提供麦胚无细胞蛋白表达系统预混mixmix中包含蛋白转录、翻译的所有必需酶类、tRNA和离子环境,只需加入DNA模板即可一步完成蛋白的转录和翻译,直接获取目的蛋白。此外,试剂盒中还包括线性模板构建所需PCR引物,以及pEU-01-DHFR质粒作为阳性对照,另提供带有荧光标记的赖氨酸-tRNA,用以标记合成蛋白,便于观测。本试剂盒利用双层液相反应法(Bilayer)表达目的蛋白,只需1-4小时即可观察到目的蛋白,每个反应蛋白表达量为1-3 µg,除了可以应用于Western蛋白检测实验之外,还可作为模板测试试剂,快速检测目的质粒或片段能否成功表达目的蛋白。能够在本试剂盒表达成功的模板质粒或片段,可直接应用于CFS系列其他试剂盒中,做大量蛋白表达使用。


产品特点

选择方便:可用质粒模板,也可直接使用PCR片段进行蛋白表达

操作简单:采用Bilayer 反应方法,不需要特殊仪器,只需加入模板即可进行反应

表达快速:1-4小时即可观察到目的蛋白表达

检测容易:可选择使用荧光标记的Lys-tRNA,用过荧光直接检测蛋白表达效果


储存条件

低于-70保存,避免长期存放于干冰环境,反复冻融不超过2


实验例


使用质粒作为表达模板时,可以使用pEU系列质粒作为表达载体,将带有起始密码子和终止密码子的cDNA克隆至载体上,提取质粒后直接用于蛋白表达。亦可使用其他带有SP6启动子的表达载体进行蛋白表达,不要使用T7启动子。



使用PCR片段做表达模板时,应使用两步PCR反应,将核糖体结合位点和转录启动子作为上游引物的5’端,经PCR反应结合到片段上。片段纯化后可用于蛋白表达。



转录和翻译采用双层液相反应法(Bilayer Reaction Method),通过反应液和麦胚裂解物造成的密度差,相互渗透,在液面相交处发生反应。随着时间的推进,溶液逐渐由两相变为单一的混合物而终止。



使用Premium One表达对照质粒中DHFR蛋白结果展示。1. 使用考马斯亮蓝(CBB)染色,蛋白表达后4-12小时可见目的蛋白条带。2. 使用Western Blot标记,表达后1-2小时可标记出目的条带。3. 使用Lys-tRNA参与蛋白表达,2-4小时候可通过荧光检测目的蛋白的表达情况。

地址:北京市海淀区西小口路66号东升科技园(北领地)C7-3 电话:800-990-6057
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