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无细胞蛋白表达系统

发布日期:2012年07月24日   浏览次数27888

 

 无细胞蛋白表达系统,含有蛋白合成所需各主要组分(氨基酸、酶、各种因子等),不受细胞核(核酸DNA/RNA)、线粒体、细胞骨架等的干扰,能够在体外快速、大量表达蛋白。体外无细胞蛋白表达系统分为原核和真核两大类,原核系统以细菌裂解物为基础,如大肠杆菌系统;真核系统以真核细胞裂解物为基础,包括麦胚系统、昆虫系统、兔网织红细胞系统等。这一真正的“开放”系统,能够特异性表达目的蛋白,产生的蛋白可用于蛋白质功能检测、结构分析等下游实验。该系统应用至今,已成功表达超过2 万种蛋白,其中包括13364 个人类的基因。部分数据列表如下:



无细胞蛋白表达系统特点

■ 操作简便:只需按照说明书添加各种成分即可,像做PCR 一样简单

■ 需时短:只需2-24 小时即可完成实验

■ 表达量高:可实现规模表达,最大表达量可达50 mg/10 ml 反应体系

■ 轻松表达困难蛋白:突破传统细胞内表达的极限,实现毒蛋白、膜蛋白、包涵体及不溶蛋白的表达

■ 蛋白共表达:可以进行多个模板的同时表达

■ 开放系统:能够添加蛋白酶抑制剂、稀有密码子,进行氨基酸标记等


无细胞蛋白表达系列技术简介

CFS无细胞蛋白表达系列为真核体外无细胞蛋白表达系统,使用独特的技术去除了翻译抑制物的麦胚提取物(WEPRO ),能够大量表达可溶性的全长蛋白。该系列产品采用非偶联的转录和翻译系统,目的蛋白得率与RTS 系列产品相当。

1)CFS 无细胞蛋白表达原理

* 非偶联的转录和翻译系统

CFS 系列产品中包括模板构建、转录和翻译反应所需全部试剂。首先构建携带SP6 启动子、E01 增强子、目的基因的线性模板或质粒,随后在转录反应液中进行体外转录,再以获得的mRNA 为模板进行翻译反应。翻译反应有三种方法可供选择,分别为Bilayer Reaction Method、Repeated Batch Method、Filter-and-Feed Method,这些方法都可以和仪器配合使用,其中Bilayer Reaction Method 手工操作非常简便,因此被广泛使用。


* 多种翻译系统

对于WEPRO 而言,前期的模板准备和转录mRNA 相同,不同的是翻译系统,可以采用以下三种方法进行翻译。Bilayer Reaction Method 利用反应液和麦胚裂解物之间的密度差相互渗透,在液面相交处进行反应,随着时间的推进,溶液逐渐由两相变为单一混合物而终止。用移液器混匀后,即得到包含目的蛋白的溶液。该方法可以与自动化仪器(Protemist DT II, GenDecoder )配合使用。也可以手工操作(请参见说明书)。Repeated Batch Method 通过离心的方式不断的使反应液通过麦胚裂解物,从而不断的合成目的蛋白,该方法既可以手工操作(需要离心机),也可以配合仪器使用。Filter-and-Feed Method 利用 Protemist XE 仪器,不断供给mRNA 和翻译反应液,并过滤掉翻译反应的副产物,从而大规模生成目的蛋白。













 

Premium

PLUS
Expression

Kit

WEPRO1240

系列

WEPRO7240

系列

1240

1240H

1240G

7240

7240h

7240g

最大得率/反应

40 μg

20 μg

100 μg

500 μg

40 μg

200 μg

1 mg

标准反应体系

226 μl

226 μl

1.2 ml

6 ml

226 μl

1.2 ml

6 ml

模板类型

线性/ 质粒

质粒

质粒

质粒

质粒

质粒

质粒

反应时间

16h

16h

16h

16h

16h

16h

16h

反应温度

15

 /26

15

/26

15

 /26

15

/26

15

/26

15

/26

15

/26























了解CFS更多产品,可点击进入CFS官网

http://www.cfsciences.com/eg/index.html


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